实验干货 2024.07.18 抗生素筛选预实验 抗生素预实验目的是确定抗生素的最佳浓度，同时确定抗生素对所选细胞的最低作用浓度，以便用于病毒感染后通过合适的抗生素浓度进行稳定株构建。 实验步骤（以 Puromycin 筛选为例） 1 细胞培养：取待测培养且状态良好的细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入 96 孔培养板中，待细胞生长至70~80%汇合度左右开始加药。 2 加入 Puromycin 药物进行空细胞致死最低浓度筛选，浓度范围一般设置为：1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL 等。 *以上为终浓度，具体浓度设计可参考文献中相关细胞常用浓度并设置梯度，一般设置7~8 个浓度点，并做2~3 复孔 3 药物处理 72h 后细胞全部死亡的最低药物浓度，即为后续 Puromycin 抗性细胞的筛选浓度（全致死浓度），可通过不同浓度加药细胞拍摄图片分析，或酶标仪检测 CCK8 数据分析，建立死亡曲线，确定最佳筛选浓度。 常见抗生素类型及浓度范围推荐 嘌呤霉素盐酸盐Puro（首选） 使用浓度 1~10μg/mL 作用时间 72 小时 杀稻瘟菌素S Blasticidin S （次选） 使用浓度 5~50μg/mL 作用时间 72 小时 遗传霉素G418 使用浓度 100μg/mL~1mg/mL 作用时间 10~14 天 潮霉素B Hygromycin B 使用浓度 50-500 μg/mL 作用时间 7-10 天 抗生素筛选建立稳转株 带有不同抗性的慢病毒在成功感染细胞后，能使细胞在含有一定浓度对应抗生素的培养基中存活，而未感染上慢病毒的细胞则无法存活。因此在抗性筛选压力下，可成功筛选稳定表达目的基因的细胞株。 如：带有 Puromycin 抗性的慢病毒感染 48~72 小时后（70~80%汇合度），将细胞继续培养于含适当浓度 Puromycin 的培养液中，每 3~4 天更换一次含抗生素的培养液，直至未感染病毒的对照组细胞被抗生素杀光，而感染病毒组再无细胞出现死亡（如病毒载体带有荧光标记，荧光效率需达到 100%）后，进行混合克隆及单克隆稳定株筛选。 注：筛选浓度即为抗生素预实验确定该细胞的全致死浓度，筛选时可设置未感染病毒的野生型细胞作为对照，加入等量浓度抗生素。 吉满抗生素产品 吉满可提供不同规格的嘌呤霉素盐酸盐、杀稻瘟菌素S(灭瘟素)Blasticidin S、遗传霉素G418 Sulfate、潮霉素B(hygromycin B)等抗生素可用于细胞实验中的抗性筛选。 产品名称 货号 规格 嘌呤霉素盐酸盐Puromycin dihydrochloride GM-040401 25mg/100mg/ 250mg/500mg/1g 遗传霉素G418 Sulfate(Geneticin) GM-040402 1g/5g 潮霉素B Hygromycin B GM-040403 1g/10g 杀稻瘟菌素S(灭瘟素)Blasticidin S GM-040404 10mg/5*10mg 盐酸博莱霉素 GM-040407 100mg/100mg*10 吉满引文（部分） Feng J, Zhong H, Mei S, et al. LPS-induced monocarboxylate transporter-1 inhibition facilitates lactate accumulation triggering epithelial-mesenchymal transformation and pulmonary fibrosis[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2024, 81(1): 206. #GM-040401 Lin Z, Liu Y, Xu T, et al. STAT3-Mediated Promoter-Enhancer Interaction Up-Regulates Inhibitor of DNA Binding 1 (ID1) to Promote Colon Cancer Progression[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2023, 24(12): 10041. #GM-040404 Jia X, Xi J, Tian B, et al. The tautomerase activity of tumor exosomal MIF promotes pancreatic cancer progression by modulating MDSC differentiation[J]. Cancer Immunology Research, 2024, 12(1): 72-90. #GM-040403 吉满生物科技（上海）有限公司成立于2011年，是专业从事生物科技前沿技术研发的高新技术企业。以病毒包装为基础，密切关注行业最前沿的科研进展，十一年深耕细作，创建了具有自主知识产权的分子生物学、细胞生物学、慢病毒、腺相关病毒、报告基因、抗体表达六大技术平台。
2020年成立了专业细胞系子品牌DDXCELL，提供报告基因检测、病毒包装、工程细胞株构建，基因编辑及药物筛选评价等技术服务及相关产品。
2022年载体品牌“载体通·Genovector”焕新升级，同时推出全新试剂品牌“优试剂·Genoagent”，贯穿科研始末。
吉满可为客户提供几千种的现货载体和一站式定制服务。
2026-03-09
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