ICH M10和9012指导原则关于配体结合分析的深度对比解读（下）

上篇文章（点击此处查看上篇）我们对两份指导原则中关于关键试剂和方法验证的内容为大家进行了比较分析。本篇我们将对研究样品分析、试验样品再分析（ISR）、部分验证和交叉验证以及内源性待测物的具体内容进行比较分析，并对两篇文章的内容进行总结。

研究样品分析

样品分析

除长期稳定性验证外，验证完成后可进行样品检测，研究样品、质控样品与标准曲线样品应与经过验证的分析方法保持一致，ICH M10指导原则和9012指导原则中对分析批的组成、质控摆放位置以及接受标准要求一致。此外，ICH M10指导原则中还明确了特殊情况的应对方式：

校正标样浓度设置超过6个，当其中一个校正标样不符合接受标准时，则应剔除该校正标样，剔除后对标准曲线进行重新回算；

若是标准曲线的ULOQ或LLOQ因不符合接受标准被拒绝，则启动次级定量上限或次级定量下限（保持原来的接受标准，即实测浓度为标示值的±20%），超出修订后标准曲线定量范围的研究样品应重新分析。

研究样品分析中，至少2个水平的质控样品应落入研究样品测定的浓度范围内。

样品重分析

ICH M10指导原则中明确了在开始分析研究样品之前，应在方案、研究计划或SOP中预先规定重分析生物样品的可能原因、重分析的数量和重分析后选择报告值的标准；应在生物分析报告中报告并讨论重分析的样品数量（以及占样品总数的百分比）。

对于生物等效应试验，使用单独的表格报告被拒绝分析批的样品检测浓度，不可接受由于PK原因（例如样品浓度不符合预期曲线）对研究样品进行重分析。上述内容在9012指导原则配体结合分析处未见相关描述。

试验样品再分析（ISR）

9012指导原则在色谱分析部分有详细说明，配体结合法同样适用，与ICH M10指导原则均对要开展ISR的情况以及ISR样品数量的选择进行了说明。

ICH M10指导原则明确了ISR不通过时的处理方式，即如果总体ISR结果不符合接受标准，则应进行调查并纠正，应该有SOP指导如何引发和开展调查。如果调查不能确定失败原因，则也应在分析报告中提供ISR失败对试验有效性的影响。

ICH M10指导原则对于ISR满足接受标准，但仍需要开展调查的情况进行了说明，还提出若ISR结果与原始值偏差很大（例如>50%或“异常值”）的单个样品不应引发对原始样品的重新分析，且不必调查。ISR样品数据不应取代研究样品的原始数据。

部分验证和交叉验证

部分验证

部分验证旨在评价对已经完整验证的生物分析方法的修改。部分验证的范围可由少至一个分析批的准确度和精密度的测定，到接近于完整验证。如果在一个场所建立了稳定性，则不必在另一个场所重复验证。ICH M10指导原则中对于配体结合分析中需要部分验证的情况进行了列举，9012指导原则配体结合分析处未见相关描述。

交叉验证

当涉及多个生物分析方法和/或多个生物分析实验室时，需采用交叉验证来评估报告数据间的相关性。ICH M10指导原则中对于配体结合分析中需要交叉验证的情况进行了列举，9012指导原则配体结合分析处未见相关描述。

内源性待测物

对于同为内源性物质的待测物（例如替代疗法），当检测方法不能区分治疗药物和内源性物质时，待测物检测的准确性成为挑战，M10指导原则为内源性物质分析提供了依据，9012指导原则中无相关描述。

总结

综上所述，本文通过对ICH M10和9012指导原则的配体结合相关内容进行解读，详细解析了两个指导原则在生物分析方法验证和样品检测过程中的要求。通过对比解读内容可以看出，2022年版的ICH M10对于研究的指导更为全面和清晰，所以一经发布便成为相关研究的统一标准，促进了生物分析规范化的一致性。

本机构在研究过程中，遵循ICH M10与9012两个指导原则，其中以ICH M10为主，9012指导原则作为补充，按照从严原则，以保证符合FDA及NMPA申报的要求。

参考文献：

[1]《生物样品分析方法验证》, ICH M10, 2022.

[2]国家药典委员会（ChPC）.《生物样品定量分析方法验证指导原则》, 2020年版药典.

关于天勤生物&天勤生物武汉分公司

关于天勤生物

天勤生物成立于2009年，是一家以大动物试验为特色、聚焦新药研究与评价的CRO高新技术企业，为客户提供一站式创新药物研发服务，致力于以更短的实验周期、更高质量的研究报告加快新药上市进程。

▪ 强大的项目承接能力：已有近30000㎡符合GLP规范的实验室投入使用，在建实验场地约80000㎡，可开展基于猴、犬、兔、大鼠、小鼠、豚鼠等实验动物的试验研究；

▪ 国际接轨的技术体系：GLP实验室满足国内、美国FDA、欧盟OECD、澳洲TGA等GLP标准，并通过国际AAALAC完全认证；

▪ 丰富的项目经验：国内外知名专家团队领衔，千余项专题研究、200多个新药申报品种、超过60个中外IND申报的品种通过中国CFDA/NMPA 、美国FDA和澳大利亚TGA的审批进入临床。

关于天勤生物武汉分公司

湖北天勤生物武汉分公司（安全性评价中心）是湖北省第一家民营GLP研究机构，现有一支近300人的专业技术团队，具备了开展中国NMPA、美国FDA项目的质量管理体系和资质，同时通过了国际AAALAC完全认证。公司目前拥有超过10000m²的设施，可开展啮齿类和非啮齿类的单次给药、重复给药、生殖【大鼠I、II和III段；小鼠I、II和III段；兔II和兔III段；伴随食蟹猴（性成熟）重复给药毒性试验的生育力评价研究、食蟹猴伴随胎盘屏障和血乳屏障的EFD试验和增强的围产期发育（ePPND）毒性试验】、遗传毒性（Ames、微核和染色体畸变）、免疫原性、安全药理、局部刺激、毒代动力学和致癌等9项GLP试验以及药效、药代动力学、毒性探索性试验（DRF）等，尤其在生物制品、化药和中药和儿科用药等方面拥有大量的非临床评价经验和成功案例，同时在上述药物的生殖与发育毒性试验设计、结果判定等方面积累了宝贵的经验；建立了国内领先的食蟹猴生殖毒性与发育毒性研究平台，是国家科技部重大新药创制科技重大专项的药物安全性评价示范平台之一。