前沿快报｜视网膜母细胞瘤治疗后ctDNA的定量分析及其与临床指标的相关性研究

编者按

一

二

治疗完成后，视网膜母细胞瘤患者血浆中RB1基因突变型ctDNA水平定量检测的是否检出可能与肿瘤转移进程相关联。

三

探究视网膜母细胞瘤患者在治疗后至少1年随访期内，血浆中原来可检测到的ctDNA水平在后续检测过程中提示未检出状态是否与患者的无转移生存率相关联。即：治疗前与眼部治疗结束后，患者血浆中有无转移的ctDNA？

四

在新确诊的视网膜母细胞瘤患儿血浆样本中，通常可以检测到ctDNA。通过摘除眼球的相关研究，我们已经证实了ctDNA源自眼内恶性肿瘤。这种ctDNA具有较短的半衰期，并能被迅速清除。尤其在眼球摘除手术期间，变异等位基因频率（VAF）所反映的ctDNA量，在视神经切断后10分钟内有50%迅速下降至无法检测的水平，90%在40分钟内降至不可测水平。

在纪念斯隆凯特琳癌症中心（MSKCC），为保留患眼及其视功能，大多数患者倾向于避免眼球摘除，而选择接受动脉内化疗。这种治疗方式已被证实能有效降低患儿血浆中的ctDNA水平，使其迅速降至低于检测阈值。

目前，关于在诊断时具有可测量VAF的视网膜母细胞瘤患者，其血浆ctDNA水平的长期测量数据或与临床过程的相关性研究资料较少。在治疗（通常是指眼球摘除）多年后再次进行检测时，许多患者的血浆ctDNA水平已无法检出，但这些患者中的大多数在治疗前并未进行血浆ctDNA水平的测量，因为ctDNA测量技术在多年前尚未普及。据我们所知，尚未有研究将诊断时血浆ctDNA水平可测量的患者长期临床进程与ctDNA水平的监测结果相关联。

本项研究的执行时间为2019年6月至2023年9月。我们采用了下一代测序检测方法，对收集的血浆（使用2个Streck品牌的管子收集）和白细胞层进行了129个已知癌症相关基因的分析。纳入本研究的患者需满足治疗前血浆ctDNA水平可测量的条件，并且至少有1年随访期的患者也已完成治疗后的检测。本研究遵循了流行病学观察性研究报告强化（STROBE）指南，以确保研究的科学性和严谨性。

五

本研究共纳入24名患者（平均[标准差]年龄，20.7[17.1]个月；15名女性[62.5%]；9名男性[37.5%]）。他们在初次治疗前有可测量的ctDNA，并在治疗完成后进行了至少1年的临床随访和后续的ctDNA测量。19名患者（79.2%）患有单侧视网膜母细胞瘤；5名患者（20.8%）患有双侧视网膜母细胞瘤。

眼球摘除术或动脉内化疗治疗完成后，收集患者的ctDNA从术后1个月或动脉内化疗周期的最后一个月开始，最多收集12次。完成治疗后至少1年随访期内，在原来可检测到的ctDNA水平的24名患者中其后续检测过程中提示未检出状态的23名患者（95.8%）中均未发现肿瘤转移，但有1位患者在结束治疗后其ctDNA水平在后续检测过程中持续可测，并出现了肿瘤转移。 

（三）一名巩膜及眼眶肿瘤患者（患者21）接受了改良的眼内容物摘除术，术前视力丧失（VAF为92.4%），一个月后出现了血行转移，遂给予多药联合系统性化疗后并记录了后续ctDNA的测量水平（患者21）提示ctDNA可持续检出。一年后，患者病情进展，处于临终关怀状态。这表明眼球摘除术/眼内容物摘除术后可测量的血浆ctDNA的持续存在是肿瘤转移的标志。每个病例中对基因变异的识别存在差异见表2：

六

这是首次研究视网膜母细胞瘤患者治疗前后血浆ctDNA水平与临床结果的关系。在23例儿童患者中，眼球摘除术治疗前可检测到ctDNA，术后ctDNA未检出，且随访的1年内无复发或转移，完成治疗后ctDNA检测为阴性预示无转移，而ctDNA持续检出则可能发生转移；动脉内化疗后ctDNA快速消除，长期随访未见转移，提示ctDNA的消除则未发生转移。尽管需要更多的病例来确定，但研究结果表明，治疗（眼球摘除术或动脉内化疗）后初次ctDNA的检出可能发生转移，血浆中原来可检测到的ctDNA水平在后续检测过程中提示持续存在可能与转移有关；反之，未出现转移。

七

此队列研究中，治疗前检测到血浆ctDNA水平的视网膜母细胞瘤患者，若在治疗完成后（无论是眼球摘除术还是动脉内化疗）血浆中的ctDNA消失则未发生肿瘤转移（与无转移生存有关）；若初次治疗后的初次血浆ctDNA水平可检测到则发生了肿瘤转移（1名患者），若初次治疗后的初次血浆ctDNA水平不可检测则未发生肿瘤转移（与无转移生存有关）。