重组胰蛋白酶的选型指南

选型指南

● 不含冻干保护剂，高纯度 (SDS-PAGE) ≥95%，蛋白含量≥90%；

● 更高比活性，通常≥4500USP units/mg pro.，每批次不同，详见COA

● 含冻干保护剂，高纯度≥95%，蛋白含量＞50%；

● 更高比活性，通常≥5000USP units/mg pro.，每批次不同，详见COA

● 高纯度≥95%，蛋白含量＞30%

● 不易自切，稳定性较高

● 更高比活性，通常≥2500USP units/mg pro.，每批次不同，详见COA

“ 重组胰蛋白酶（细胞培养级）

● 溶液配制：重组胰蛋白酶室温下融化，取适量胰蛋白酶，加入HBSS平衡液（或其他适宜细胞消化的缓冲液，如需要加入EDTA其终浓度推荐 0-1mM，最好不超过2mM），推荐一般使用的胰蛋白酶浓度约为 0.1-0.3mg/ml（浓度根据不同细胞进行调整），轻柔混匀；该步骤可在室温环境操作；

● 使用0.22μm滤膜对上述胰蛋白酶溶液过滤并转移至无菌容器中；该步骤可在室温环境操作；

● 过滤后的胰蛋白酶溶液应在当天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化细胞）

“ 重组胰蛋白酶（药典级）

● 蛋白质的准备——将蛋白质溶解在25mM Tris-HCl，pH8.0的溶液中。

● 酶液准备——称取所需的酶粉，用10mM HCl 溶解，使酶液浓度为1-10mg/ml。

● 反应条件——酶量：目的蛋白（质量比）=1:50-1:1000，最适pH为7.0~9.0

“ 重组热稳定胰蛋白酶

● 蛋白酶切

1）将蛋白质溶解在25mM Tris-HCl（pH7.0-10.0）缓冲液中。

2）将酶粉用1mM HCl（或25mM Tris-HCl，pH8.0）溶解，使酶液浓度为1-10mg/ml。

3）按照酶量：目的蛋白=1mg:50mg-1mg:500mg，或者酶量：目的蛋白=10U:1mg-100U:1mg,在pH 7.0-10.0条件下酶切。

● 细胞消化

1）取酶粉，用HBSS平衡液（或其他适宜细胞消化的缓冲液，如需要加入 EDTA 其终浓度推荐0-1mM，最好不超过2mM），配制为蛋白浓度0.1-0.3mg/ml（或者酶活浓度300U/ml-1000U/ml）的消化液，轻柔混匀。

2）使用 0.22μm 滤膜对上述胰蛋白酶溶液过滤并转移至无菌容器中。

3）该消化液可当天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化细胞），也可在2-8℃条件下保存30天。（若需在2-8℃保存更长时间，可购买我公司产品TrypRE select。或与我公司技术人员联系。）

“ 重组胰蛋白酶（1:250）

● 取0.25g重组胰蛋白酶（1：250）粉末，加入100ml HBSS平衡盐溶液制成0.25%的溶液，在室温下搅拌溶解约 10min。

● 用磷酸和氢氧化钠溶液调pH至7.4-7.8之间，用0.22μm膜过滤，置于-20℃下保存。

# 说明：

1、处理难消化细胞，可配制为 0.4-1.0%溶液。

2、HBSS平衡盐溶液配方：400mg/L KCl，60mg/L KH2PO4，350mg/LNaHCO3，8000mg/LNaCl，121mg/L Na2HPO4·12H2O，1000mg/L葡萄糖