上新 | 高效捕获，精准检测！单细胞5’RNA&V(D)J文库制备试剂全方面赋能生命科学实验室

2024年9月11日，在华大智造主办的Future of Omics大会上，华大智造发布了DNBelab C系列的新产品——高通量单细胞5’RNA&V(D)J文库制备试剂盒套装。这款产品专为肿瘤、疾病研究、类器官等免疫组学研究设计，同时适用于细胞治疗、疫苗评估、药物开发等领域。

作为DNBelab C系列中的第三款文库制备试剂盒，它与已发布的单细胞3’RNA和单细胞ATAC文库制备试剂盒一起，进一步完善了华大智造单细胞转录组和表观组研究的产品线，使之成为全球唯四同时拥有单细胞3’RNA、5’RNA、ATAC三大应用技术产品布局的企业，为全球生命科学实验室提供了更全面、完整的单细胞多组学研究方案。

倪鸣博士在FO大会上介绍单细胞5’RNA&V(D)J产品

本次上新的DNBelab C系列高通量单细胞5’RNA&V(D)J文库制备试剂盒套装，兼容人和鼠两个物种，包含4反应和16反应两个包装规格，可以使用DNBelab C-TaiM 4单细胞液滴生成仪完成细胞的分离和标签步骤，进而完成从细胞悬液到5’RNA和TCR、BCR文库的制备过程，配套DNBelab C系列分析包DNBC4Tools，可以实现数据的质控和基础分析。

❶ 基因检出灵敏，中值基因检出＞2,000（PBMC样本）；

❷ 捕获效率高，大于50%；

❸ 细胞识别精确，液滴多胞微珠可区分；

❹ 液滴污染率低，细胞多胞率每1,000个细胞小于0.4%；

❺ 投入细胞梯度范围广，5,000~30,000；

❻ 兼容细胞尺寸大，液滴尺寸大，可兼容较大直径细胞，直径＜60μm；

❼克隆性检出能力强，TRA/TRB配对率＞65%（PBMC样本）。

通过对微珠表面进行修饰连接Cell Barcode引物，对每个细胞释放的mRNA进行唯一的标签标记，并在该段引物的尾部设计3个rG碱基，用于杂交游离PolyT所捕获的mRNA，并进行液滴内的逆转录，随后在逆转录酶和TSO序列的作用下，mRNA的5’端合成3个C碱基，和磁珠上的引物尾部设计的序列碱基rG进行杂交捕获，完成每条mRNA的5’端序列捕获，之后进行mRNA的全长序列扩增，产物分成3份，分别进行5’RNA的片段化、加接头等文库制备过程、TCR或BCR的巢式PCR扩增及其他文库制备过程。

DNBelab C系列 单细胞5’RNA&V(D)J文库制备原理

试剂盒完美适配DNBSEQ平台，利用DNBelab C系列高通量单细胞5’RNA&V(D)J文库制备试剂盒套装以及DNBelab C-TaiM 4单细胞液滴生成仪完成文库制备过程，使用DNBSEQ-T7测序仪进行测序，使用DNBC4Tools分析工具进行测序数据的处理，试剂盒的性能表现优异。

DNBelab C系列 单细胞5’RNA&V(D)J性能表现

✔ 平台稳定性强

使用试剂盒5’RNA&V(D)J（人）对人的冻存PBMC样本进行重复试验测试，投入细胞的数量均为10,000，结果显示两平行样本（PBMC1以及PBMC2）的细胞捕获数量分别为8,911和8,621，基因中位数分别为2,223和2,384，最终的细胞注释类型和细胞组成比例高度一致，说明此试剂盒平行样本之间的表现稳定且一致。

人PBMC样本的单细胞5’RNA&V(D)J重复试验表现

✔ 克隆型检测能力强

使用小鼠的脾脏样本对5’RNA&V(D)J试剂盒进行性能测试，投入细胞数量为20,000，捕获细胞数量是10,396，其中比对到TCR细胞类型的个数是922个，V-J配对比例达到69.63%，比对到BCR细胞类型的数量是4,987个，V-J配对比例达到78.08%，5’RNA报告显示基因中位数为1,610，具有良好的克隆型检测能力。

小鼠脾脏样本的单细胞5’RNA&V(D)J数据表现

最后，华大智造高级副总裁倪鸣博士表示，“在单细胞领域，华大智造发布的多款DNBelab C系列单细胞产品，收获了众多企业和科研用户的好评，在过去的一年时间里，华大智造在中国区完成了30多家企业的单细胞产品服务商认证，以及在海外市场的欧非区和亚太区进行了迅速布局。

本次单细胞5’RNA&V(D)J产品的推出，结合华大智造近期发布的MGIDS-1000多功能液滴分选一体机，贯通了从液滴生成、细胞分选到测序的全流程，可以实现高通量的抗体发现、单B细胞分析及CAR-T筛选，标志着华大智造在免疫学领域的应用上的又一突破，为抗体药物开发和个性化细胞治疗提供了新的工具和整体解决方案。此外，在科研产出上，基于华大智造单细胞平台，已累计产出论文100篇，其中包括3篇Nature，2篇Cell主刊论文，另外有20多篇论文发表在CNS子刊，充分证明了该单细胞平台性能的优越性。”

华大智造高级副总裁倪鸣博士

未来，华大智造将进一步深耕单细胞组学领域，发挥自身在基因测序领域、实验室自动化领域的组合优势，为规模化的科学研究，为单细胞组学全面进入临床及精准健康研究，提供更为优质、标准的产品组合，赋能单细胞多组学研究开启标准化、规模化时代！