PCNA、P16、MMP9在人参皂苷Rg3抗肝癌淋巴道转移中的表达及意义

荷瘤小鼠的制备

将呈对数期生长的小鼠肝癌Hca-F₂₅//6A₃-F(F)细胞0.2ml(细胞浓度为2×10⁶个/ml)，注射到615系小鼠腹腔内。取第二代腹水细胞(细胞存活率>95%，细胞浓度为2×10⁶个/ml)0.2ml，接种于615系小鼠的右足垫，于接种后第15天取右足瘤体(原发瘤)样品。继续给药5天后将动物断头处死，收集肿大的淋巴结(转移瘤)样品。

实验分组及用药

实验分为5组(每组动物15只)：Rg3预防组(接种瘤前用Rg3)，Rg3治疗组(接种瘤后用Rg3)，两药合用组(接种瘤后用Rg3+DDP)，阳性对照组(接种瘤后用DDP)，阴性对照组(接种瘤后用生理盐水)。人参皂苷Rg3经灌胃给药(0.1ml/只，剂量为3mg/kg/d)；阳性对照药物顺铂按1mg/kg/d经腹腔注射给药。Rg3预防组于接种肿瘤前7天开始给药，其余各组均于接种当日起连续给药20天。

检测指标

应用免疫组织化学方法检测PCNA、P16及MMP 9在各实验组的原发瘤及相应转移瘤(淋巴结)中的表达水平。

P16免疫组化结果

P16在Rg3用药各组的原发瘤和两药合用组的转移瘤中的表达均较阴性对照组增加，有统计学意义(P<0.05或P<0.001)；P16在转移瘤中以两药合用组中P16的增幅最大，人参皂苷Rg3预防组及Rg3治疗组次之(表1)。

 PCNA免疫组化结果

人参皂苷Rg3和顺铂各用药组中，PCNA在原发瘤中的表达均较阴性对照组降低，差异显著(P<0.001)，而在转移瘤中变化不大(表2)。

MMP9免疫组化结果

MMP9在用药各组原发瘤中的分泌和表达均较阴性对照组有所增加。原发瘤中MMP9分泌和表达的阳性率(阳性表达瘤体数/总瘤体数)低，而在转移淋巴结中均见MMP9的表达(表3)。

研究表明：人参皂苷Rg3具有上调荷瘤小鼠抑癌基因P16表达，及下调PCNA和MMP9表达的作用，并与常用化疗药物顺铂之间有协同作用。人参皂苷Rg3对所研究的3种肿瘤相关的增殖、分化和转移相关的蛋白因子的调节作用及瘤靶组织特性不同，如对于PCNA，作用的靶组织为原发瘤，对P16在原发瘤和转移瘤中均有作用，而对MMP9在转移瘤中的作用更强些。

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