肿瘤免疫细胞分选的“得力助手”——MojoSort™ Human/Mouse CD45 Nanobeads来啦！！！

一直以来，如何从肿瘤中分离出免疫细胞是医学及科研领域的难题之一。那么如何从复杂的肿瘤组织中分离出数量稀少的淋巴细胞呢MojoSort^™ Human/Mouse CD45 Nanobeads可以成为您肿瘤免疫细胞分选的“得力助手”。相关的产品如下：

接下来小编会带大家从BioLegend内部测试结果和文献实际应用分享两部分来了解产品的具体情况。首先从内部测试图看看MojoSort^™ Human/Mouse CD45 Nanobeads产品的分选效果，然后从文献分享来详细了解产品在实际应用中是如何分选肿瘤中的免疫细胞。

BioLegend内部测试结果

图1. MojoSort^™ Human CD45 Nanobeads质控图

B. 小鼠肿瘤组织样本免疫细胞分离

Cat.no.480027/480028，MojoSort^™ Mouse CD45 Nanobeads

通过胶原酶酶解C57BL/6小鼠的肺组织制备单细胞悬液，使用MojoSort^™ Mouse CD45 Nanobeads分离CD45细胞。分选后的细胞用 Alexa Fluor^®647-CD45（Clone 30-F11）标记，用7-AAD做死活细胞染色。分选前后细胞比例详细见下图2。

图2. MojoSort^™ Mouse CD45 Nanobeads质控图

文献实际应用分享

Cat.no.480030，MojoSort^™ Human CD45 Nanobeads

下游实验：单细胞转录组测序、定位和聚类分析等

文献研究中，受试者被受邀进行一项前列腺癌耐药性决定因素纵向观察性的临床研究。在获得同意后，笔者获得受试者的血液进行循环肿瘤细胞（CTC）分离。为了富集循环肿瘤细胞（CTC），经分离液分离后收集外周血单个核细胞（PBMC）的间期部分，保证在cDNA生成之前将细胞在PRIME-XV肿瘤球体培养基中培养，然后扩展到肿瘤球体中1-2周，使用MojoSort^™ Human CD45 Nanobeads（BioLegend，Cat#480030）来耗尽CD45+细胞。随后对富集的循环肿瘤细胞（CTC）进行单细胞转录组测序、定位和聚类分析，实验结果详细见图3。

笔者通过研究表明NQO1抑制确实增强了原位模型中前列腺肿瘤的发生。NQO1信息和蛋白在晚期前列腺癌中减少，与多个队列的生存和前列腺癌患者的循环肿瘤细胞（CTC）的生化复发（BCR）相关。此外，还发现NQO1的抑制通过TGF-β信号激活诱导EMT。TGF-β治疗前列腺癌细胞降低了NQO1水平，并模拟了NQO1敲低细胞的分子变化。研究结果显示：共同提供了证据来表明NQO1作为一种监护者，在保护前列腺癌细胞免受与晚期疾病进展相关的TGF-β介导的EMT变化。

图3. NQO1在晚期前列腺癌和转移性组织中被抑制

B.分选样本：小鼠黑色素瘤细胞的肺转移组织样本

t.no.480028，MojoSort^™ Mouse CD45 Nanobeads

下游实验：RT-PCR和实时荧光定量PCR分析、微生物群分析等；

在研究中，笔者评估了VSL#3益生菌制剂在小鼠肺转移模型中的作用，给小鼠喂食VSL#3，增加了与SCFAs产生菌群相关的细菌。丙酸和丁酸是减轻黑色素瘤细胞转移的主要有效的SCFAs，它们作用于肺内皮细胞产生CCL20，促进Th17细胞的募集，从而抑制小鼠黑色素瘤细胞的肺转移。文献中，笔者将小鼠的肺组织消化为单细胞悬液后用MojoSort^™ Mouse CD45 Nanobeads（BioLegend）分离白细胞、非白细胞细胞。流式细胞术检测白细胞的纯度值为大于等于90%。随后做了RT-PCR和实时荧光定量PCR分析、微生物群分析等实验分析，微生物群分析的实验结果见下图4。

图4. VSL#3处理改变了肠道微生物群的组成，增加了产生SCFA的菌群的数量。采用16S rRNA分析各组肠道菌群组成

【参考文献】