人参皂苷Rg3联合奥沙利铂通过下调PCNA和CyclinD1，抑制肝癌细胞增殖，促进细胞凋亡

细胞培养：

肝癌细胞系SMMC-7721细胞在37°C的RPMI-1640培养基中培养，含有10%胎牛血清，100U/mL青霉素和100µg/mL链霉素，用5%二氧化碳加湿。处于对数相的细胞被应用于以下实验。

分组及细胞处理：

空白组、人参皂苷Rg3组、奥沙利铂组三组。MTT法测定人参皂苷Rg3的适当浓度为15µg/mL，奥沙利铂为0.25µg/mL。然后用15µg/mL人参皂苷、0.25µg/mL奥沙利铂和15µg/mL人参皂苷+0.25µg/mL奥沙利铂处理细胞48h。

检测指标：

本研究采用MTT法检测不同处理条件下肝细胞癌细胞SMMC-7721的增殖率。采用流式细胞术检测不同治疗方法后肝癌细胞的凋亡率。采用免疫荧光法和免疫印迹法评价不同细胞组中增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达情况。

统计分析：

数据采用SPSS 17.0软件进行分析。多组间比较采用方差分析。双侧p<0.05，认为差异有统计学意义。

人参皂苷Rg3+奥沙利铂治疗后，SMMC-7721细胞的增殖减少

在人参皂苷Rg3或奥沙利铂处理48h和72h后，SMMC-7721细胞的增殖显著下降(表1，p<0.05)。人参皂苷Rg3和奥沙利铂的最佳浓度分别为15µg/mL和0.25µg/mL。检测15µg/mL的人参皂苷Rg3+0.25µg/mL的奥沙利铂联合使用对SMMC-7721细胞增殖的影响，结果表明，与人参皂苷Rg3组和奥沙利铂组相比，人参皂苷Rg3+奥沙利铂处理后的细胞增殖明显降低。(图1,p<0.05)

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人参皂苷Rg3+奥沙利铂可显著促进SMMC-7721细胞的凋亡

采用流式细胞术检测人参皂苷Rg3和奥沙利铂对SMMC-7721细胞凋亡的影响。如图所示。2A和B时，人参皂苷Rg3或奥沙利铂中SMMC-7721细胞的凋亡率较对照组显著升高。此外，与人参皂苷Rg3或奥沙利铂治疗相比，人参皂苷Rg3+奥沙利铂对SMMC-7721细胞显示出更显著的促凋亡作用(p<0.01)。

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人参皂苷Rg3+奥沙利铂下调了SMMC-7721细胞中Cyclin D1和PCNA的蛋白水平

采用免疫印迹法检测不同治疗后SMMC-7721细胞中抗凋亡蛋白cyclin D1的表达水平。结果显示，人参皂苷Rg3组和奥沙利铂组中cyclin D1的表达量明显低于空白组。此外，人参皂苷Rg3+奥沙利铂组的cyclin D1水平明显低于人参皂苷Rg3组和奥沙利铂组。(图3A，B，p<0.001)。并采用免疫荧光法检测增殖相关蛋白PCNA的表达。人参皂苷Rg3或奥沙利铂治疗后，PCNA的表达明显降低。人参皂苷Rg3+奥沙利铂组PCNA的表达明显低于人参皂苷Rg3和奥沙利铂组。(图4A，B)。

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本研究探讨了人参皂苷Rg3+奥沙利铂对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的潜在影响。人参皂苷Rg3+奥沙利铂通过下调PCNA和细胞周期蛋白D1的表达，抑制肝细胞癌细胞SMMC-7721的增殖，促进细胞凋亡。本研究结合人参皂苷Rg3和奥沙利铂治疗肝细胞癌，为进一步的研究奠定了依据。

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