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无需NK培养，无需细胞裂解，ADCC/ADCP效应检测如此简单

CXO讯信

2024/07/22

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HIV 细胞裂解 ADCC/ADCP

抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）和抗体依赖的细胞介导的吞噬作用（ADCP）是免疫系统中的重要机制，通过这些机制，免疫系统能够有效地识别和清除感染细胞、肿瘤细胞以及其他异常或有害的细胞和病原体。比如，在流感病毒、HIV等病毒感染中，ADCC发挥重要的清除作用；在细菌感染中，ADCP帮助迅速清除病原体，防止感染扩散。而抗体药物如利妥昔单抗（Rituximab）就是通过ADCC机制用于治疗B细胞淋巴瘤，贝伐珠单抗（Bevacizumab）则通过ADCP机制参与抑制肿瘤生长。

图1. 抗体介导的细胞毒性反应示意图（ADCC），以 NK 细胞为例

ADCC（抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用）

ADCC指抗体的Fab段结合病毒感染的细胞或肿瘤细胞的抗原表位，其Fc段与杀伤细胞（NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等）表面的FcR结合，介导杀伤细胞直接杀伤靶细胞，是抗肿瘤的治疗性抗体药物发生作用的一种重要机制。ADCC的三个基本成分是效应细胞、抗体和靶细胞。其中三种Fc受体可以结合IgG：FcγRI（CD64）、FcγRII（CD3）和FcγRIIIa（CD16）。在抗体的研发过程中，NK细胞是常用来检测抗体ADCC效应的细胞。但是NK细胞通常需要从全血或者PBMC中进行分离，需要较高的实验技巧，实验周期长且实验结果不易重复。

InvivoGen开发检测ADCC效应的报告基因细胞Jurkat-Lucia^™ NFAT-CD16，可替代传统的依赖于NK细胞毒性活性的检测方法，用于抗体药物的初期筛选，大大提高筛选效率。在生物实验中。Jurkat-Lucia^™ NFAT-CD16细胞由人源T淋巴细胞Jurkat细胞系进行基因工程改造而得。细胞系在最小启动子和6个NFAT反应原件的控制下稳定表达Lucia荧光素酶报告基因，以及细胞表面Fc受体CD16a（FcγRIIIA; V158高亲和力同种异体）。并且Jurkat细胞天然表达NFAT功能性信号通路。

Jurkat-Lucia^™ NFAT-CD16细胞已经用不同的靶细胞和特定的单克隆抗体同种型组合进行功能测试。

实验数据：

图2. 抗人CD20天然和工程同种型ADCC效力的比较

Raji Null细胞与梯度浓度的抗-hCD20或抗β-半乳糖苷酶（β-gal）单克隆抗体一起孵育1小时。然后将Jurkat Lucia^™NFAT-CD16效应细胞与靶细胞共孵育6小时。通过使用QUANTI-Luc^™测定上清液中的Lucia萤光素酶活性来评估NFAT激活，反映ADCC效力

产品特点：

稳健可靠：结果重复性高

快速：在一天内完成生物测定（总培养时间7小时），并且无需裂解细胞

方便：优化效应与靶细胞的比例、荧光读数仪即可进行检测

高性价比：效应细胞可传代，20代内均可保持基因稳定。

案例分享一

使用产品：ADCC效应细胞，QUANTI-Luc荧光素酶检测试剂

影响因子：21.023

Richardson SI于2022年在Cell Host & Microbe期刊发表的文章《SARS-CoV-2 Omicron triggers cross-reactive neutralization and Fc effector functions in previously vaccinated, but not unvaccinated, individuals》中，使用InvivoGen的Jurkat-Lucia NFAT-CD16细胞检测未接种疫苗和接种疫苗的个体中的抗体依赖性细胞毒性^[1]。

ADCP（抗体依赖细胞介导的吞噬作用）

图3. 抗体依赖性细胞介导吞噬反应示意图（ADCP）

ADCP也是用于识别和介导治疗性抗体作用与肿瘤细胞的一种重要机制。与ADCC不同，ADCP由单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞通过表达FcγRIIa（CD32a）、FcγRI（CD64）和FcγRIIIa（CD16a）来介导来吞噬疾病细胞，阻断研究表明，FcγRIIa是参与该过程的主要FcγR受体。

InvivoGen公司使用基因工程改造Jurkat细胞作为效应细胞，该细胞稳定表达FcγRIIa-H131受体和由NFAT应答元件驱动表达的萤火虫萤光素酶。

实验数据：

图4. 抗-hCD20 hIgG1的ADCP效力检测

Raji Null细胞（表达hCD20）与梯度浓度的抗hCD20 hIgG1或抗β-半乳糖苷酶（β-gal）hIgG1一起孵育1小时。然后将Jurkat Lucia^™NFAT-CD32效应细胞与靶细胞共孵育6小时。通过使用QUANTI-Luc^™测定上清液中的Lucia萤光素酶活性来评估NFAT激活，反映ADCP效力

图5. 抗-hPD-L1 hIgG2的ADCP效力检测

Raji-hPD-L1细胞与梯度浓度的抗-hPD-L1 hIgG1或抗β-半乳糖苷酶（β-gal）hIgG2一起孵育1小时。然后将Jurkat Lucia^™NFAT-CD32效应细胞与靶细胞共孵育6小时。通过使用QUANTI-Luc^™测定上清液中的Lucia萤光素酶活性来评估NFAT激活，反映ADCP效力

案例分享二

使用产品：ADCC&ADCP效应细胞，QUANTI-Luc荧光素酶检测试剂

影响因子：17.694

Toledo AG于2023年在Nature communications期刊发表的文章《Pathogen-driven degradation of endogenous and therapeutic antibodies during streptococcal infections》中使用InvivoGen的Jurkat-Lucia NFAT-CD16和Jurkat-Lucia NFAT-CD32细胞检测不同处理抗体的ADCC/ADCP效应，量化抗体功能^[2]。

产品信息

*文献中使用的QUANTI-Luc^™已停产，目前只提供进阶版QUANTI-Luc^™4荧光素酶检测试剂。

其他抗体小工具

参考文献

[1] Richardson SI, Madzorera VS, Spencer H, et al. SARS-CoV-2 Omicron triggers cross-reactive neutralization and Fc effector functions in previously vaccinated, but not unvaccinated, individuals. Cell Host Microbe. 2022;30(6):880-886.

[2] Toledo AG, Bratanis E, Velásquez E, et al. Pathogen-driven degradation of endogenous and therapeutic antibodies during streptococcal infections. Nat Commun. 2023;14(1):6693.

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InvivoGen 1977年成立于法国，是法国最早的生物科技公司。公司成立的初期阶段主要提供细胞培养相关试剂，如抗支原体、细菌、真菌污染的抗生素以及基因筛选抗生素（Zeocin^™, Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B Gold, G418, Phleomycin）。随着天然免疫研究热点的兴起，InvivoGen于2000年开始致力于天然免疫相关产品的研发和生产，并成为全世界优质、专业的天然免疫相关产品生产商。InvivoGen为天然免疫研究提供一整套研究方案，包括不断更新的模式识别受体（PRRs）激动剂和拮抗剂，PRRs报告基因细胞以及天然免疫信号通路的诱导剂和抑制剂等。

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