大孔吸附树脂在中药质量分析研究中的应用

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2004-05-04

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大孔吸附树脂在中药质量分析研究中的应用
审评一部金芳
近年来，大孔吸附树脂在中药提取液分离、纯化中的研究和应用日渐增多，显示出了独特的吸附和洗脱特性。这一技术应用到中药质量分析领域中的样品供试液制备，既可提高样品供试液纯度，也可减少有毒有机溶剂的使用，将成为中药质量分析中的一项绿色技术。本文就大孔吸附树脂在中药质量分析中的应用问题谈一些浅见。
一、中药质量分析中应用大孔吸附树脂技术的优点
定性鉴别与含量测定是中药质量分析的主要内容，而制备纯度高的供试液是进行定性鉴别和定量测定的前提。应用大孔吸附树脂制备中药供试液主要有以下三个方面的优点。
1、除去干扰成分效果好。大孔吸附树脂在水溶液中对水溶性多糖、粘液质、色素、树脂等大分子物质几乎不吸附或吸附力很弱，很容易被水洗除去；反之，有一些以多糖为有效部位的制剂，收集未被树脂吸附的流出液和水洗液则可除去极性中等和较小的有机物，便于多糖的测定。如用AS-8树脂吸附桑叶提取液，收集流出液及水洗液部位用于桑叶多糖测定，回收率达98%（1）；由于树脂对中药提取液中极性中等和较小的有机物的吸附能力较强，用浓度递增的乙醇即可将这些有机物按极性由大至小的顺序依次洗脱出来，收集不同浓度的乙醇洗脱液即可得到所要组分的供试液。
以此法制得的样品供试液中干扰成分少、薄层斑点清晰、色谱峰分离度好。如应用D101树脂吸附复方天麻胶囊中的天麻素，收集10%乙醇洗脱液用于天麻素的含量测定，回收率达96.6%（2）。应用D101树脂吸附菊花中的绿原酸，收集20%乙醇洗脱液，用于黄连上清胶囊中菊花的TLC鉴别（3）。应用D101树脂吸附华海乙肝泡腾颗粒剂中的五味子乙素，以水洗、30%乙醇洗脱除去干扰成分，收集70%乙醇洗脱液用于HPLC测定，回收率均达98%（4）。
2000年版《中国药典》一部中的龟龄集、复方扶芳藤合剂、舒心口服液中黄芪甲苷的鉴别与薄层扫描测定法均应用了D101树脂制备样品供试液，与九五版药典应用有机溶剂提取法制备供试液相比，黄芪甲苷的薄层斑点清晰，提高了薄层鉴别与薄层扫描测定的准确性。
2、操作简便，样品损耗小。用大孔吸附树脂分离中药提取液制备供分析用的供试液一般有三步。第一步，将中药及其制剂溶解在水溶液中（对脂溶性较大的成分可用低浓度的乙醇溶解），定量过滤到树脂柱内，基本不损耗样品。第二步，用水冲洗柱子直至流出液无色或几乎无色，弃去水洗液（如测定多糖，则收集水洗液和未被树脂吸附的流出液）。第三步，用一定浓度的乙醇冲洗，洗脱液直接流入容量瓶中作为供试液。收集乙醇洗脱液时，柱子一般都有较明显的色谱带作指示，流出液也有较明显的颜色变化现象，帮助操作者判断收集洗脱液的起点和终点。
3、成本低，污染小。通常情况下，制备一个供定性鉴别和定量测定的样品供试液只需5-20g左右树脂（湿重），也可预制成吸附小柱成品，方便使用。一次装柱可反复使用多次，一公斤树脂（国产树脂价格在百元以下一般可供制备500多批次供试液。样品加到树脂柱内后收集几十毫升乙醇洗脱液即为样品供试液，整个过程一般不用其它有毒有机溶剂。
二、如何应用大孔吸附树脂制备中药供试液
如何应用这项技术，关键在于正确选择吸附树脂型号和解吸用乙醇浓度（洗脱剂）。下面围绕吸附和解吸两个环节作简要介绍。
（一）吸附树脂种类选择。黄酮苷、蒽醌苷、木脂素苷、香豆素可选用合成原料中加有甲基丙烯酸甲酯或丙烯氰的树脂如D201、D301、HPD600、NKA-9；环烯醚萜苷选用D301、HPD600、NKA-9等；皂苷、生物碱选用弱极性和极性树脂如D201、D301、HPD300、HPD600、AB-8、NKA-9等；脂溶性成分甾体类、二萜和三萜类、黄酮、木脂素、香豆素、生物碱选用非极性和弱极性的树脂如D101、AB-8、HPD100。
一般可选择φ12mm*200—300mm左右的玻璃层析柱。上柱时药液可以0、5—1ml/min的流速经过树脂柱。为防止吸附不充分，也可将流出液再经过一次柱子。上柱水溶液的PH值应有利于被分离成分保持分子型即可。柱内树脂的径高比可采用1：7—1：15较合适。
（二）解吸（洗脱剂）溶媒的选择。解吸溶媒一般都选用不同浓度的乙醇。样品流经大孔吸附树脂柱后，用水洗至流出液颜色近无色或颜色不再变淡时，用浓度递增的乙醇洗脱，洗脱液用HPLC法或薄层色谱法依次检查，制备用于定量分析的供试液以HPLC检测较准确。将未检出所需成分的乙醇洗脱液除去，从洗脱液中开始出现该成分时开始收集，洗脱液直接流入容量瓶中，至流出液中检不出该成分时停止收到集。用此法主要可以确定乙醇洗脱浓度。相对固定洗脱液的流速，还可确定洗脱容量。
（三）洗脱起始点和终点判断。在筛选乙醇洗脱液浓度时，应注意洗脱液的颜色和柱子内色谱带的变化情况。一般来说，洗脱液颜色在乙醇浓度变化时都会有一次从淡至深，再从深至淡的明显变化（无色的对照品和提取液颜色特别淡的则没有或不明显），结合薄层色谱或HPLC检查，操作者都能根据洗脱液的颜色变化和柱子色谱带的移动情况判断收集洗脱液的起点和终点。
适合某一成分的吸附树脂型号、乙醇洗脱剂浓度、洗脱容量确定后，在制备含有该成分的复方制剂供试液时上述参数一般不变。近年来在应用大孔吸附树脂分离中药提取液的研究方面提供了大量针对各味中药的吸附树脂型号与乙醇洗脱浓度等参数，这些参数大部分可直接应用于制备供薄层分析用的供试液，如进一步确定样品上柱量、乙醇洗脱容量后，只要回收率试验附合要求，则可应用于中药定量分析。
三、应用大孔吸附树脂制备中药供试液时应注意的问题
1、当预试验发现有的成分不能被树脂完全吸附或用乙醇洗脱一直有拖尾现象时，其原因可能为吸附树脂型号选择不正确或有些中药成分可能不适合用大孔吸附树脂吸附。
2、为进一步提高极性相近但分子结构类型不同的成分的分离度，有时还需结合应用其它树脂如聚酰胺树脂等。某一制剂含淫羊霍苷和芍药苷，可先让样品通过聚酰胺柱吸附淫羊霍苷，再让流出液经过大孔吸附树脂D101吸附芍药苷，用70%的乙醇洗脱淫羊霍苷，用30%的乙醇洗脱芍药苷，可同时制备二份纯度较高的供试液。
综上所述，应用大孔吸附树脂制备中药供试液与我们目前所用的溶剂提取法制备供试液相比，具有供试液中干扰性成分少、有毒有机溶剂应用少、成本低等优点，在中药质量分析中将具有良好的应用前景。
参考文献：
1、欧阳臻等，桑叶多糖的含量测定，《食品与科学》2003、10。
2、方晓明等，HPLC法测定复方天麻胶囊中天麻素的含量，《现代中药研究与实践》。
3、刘晓琳等，黄连上清胶囊的TLC鉴别研究，《安徽医药》，2003年7（4）。
4、王秀冬等，华海乙肝泡腾颗粒中五味子乙素的含量测定，《实用医药杂志》，2002年19（5）。
类别:审评一部

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