NIFDC 文章|一种抗体偶联药物非临床安全性评价中的制剂分析方法研究

Biologics CMC

2026/06/03

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NIFDC

目的：分别建立反相高效液相色谱 (RP-HPLC) 法和双波长分子排阻高效液相色谱 (SEC-HPLC) 法，有效分析模拟偶联断裂抗体偶联药物 (ADC) 制剂的偶联情况，搭配紫外分光光度 (UV) 法测定蛋白浓度有望满足制剂分析的需求。方法：采用未断裂的 ADC 、小分子和抗体 3 个成分物理混合，建立模拟发生部分偶联断裂的 A 组制剂以及与 A 组制剂总抗体和总小分子浓度相同的无断裂发生的对照 B 组制剂；建立 UV 法，在 252 nm 和 280 nm 波长下测定 A 组制剂和 B 组制剂的吸收度，利用朗伯 - 比尔定律计算药物抗体偶联比 (drug-to-antibody ratio, DAR) 来体现 ADC 制剂的总抗体浓度和偶联情况；采用 Zorbax Ellipse XDB-C₁₈ 色谱柱 (50 mm×2.1 mm, 3.5 μm), 柱温 35 ℃, 以 0.1% 三氟乙酸 - 水为流动相 A, 以 0.08% 三氟乙酸 - 乙腈为流动相 B, 梯度洗脱，流速 0.5 mL ・ min⁻¹, 进样器温度 5 ℃, 检测波长 252 nm, 建立 RP-HPLC 法，检测制剂内断裂后产生的游离小分子，间接地分析 ADC 制剂的偶联情况；采用凝胶 TSK G3000SWXL 色谱柱 (7.8 mm×30 cm, 5 μm), 柱温室温，以 15% 异丙醇和 85% 磷酸盐缓冲液 (0.2 mol ・ L⁻¹ 磷酸钾， 0.25 mol ・ L⁻¹ 氯化钾， pH=7.0) 为流动相，流速 0.5 mL ・ min⁻¹, 进样器温度 5 ℃, 检测器波长 252 、 280 nm, 建立双波长 SEC-HPLC 法，通过测定相应峰面积直接计算 ADC 制剂的 DAR 。结果： UV 法测定 A 组制剂和 B 组制剂的抗体总浓度 (n=3) 分别为 5.14 mg ・ mL⁻¹ 和 5.04 mg ・ mL⁻¹, DAR (n=3) 分别为 3.45±0.03 、 3.47±0.02; RP-HPLC 法可以有效检测 A 组制剂中模拟断裂掉的游离小分子，而 B 组制剂中不存在；双波长 SEC-HPLC 法测定 A 组制剂和 B 组制剂的 DAR 分别为 1.83 、 3.65 。

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