肿瘤研究的实验利器OVA，你值得了解

CXO讯信

2024/09/02

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肿瘤自身免疫疾病免疫系统疾病 CD8 过敏反应

OVA蛋白

鸡卵白蛋白（Ovalbumin，简称OVA），也称鸡卵清白蛋白，是鸡蛋清的主要成分，由12269 aa组成，分子量约172.44kD [1]。能够引起机体适度的免疫反应，因此已被用作免疫免疫学研究和疫苗研究的通用模型抗原。

在免疫学研究中，OVA作为一种T细胞依赖性抗原，能够激活特异性T细胞反应。它被用来研究T细胞的活化、增殖和功能，以及树突状细胞（DCs）的抗原呈递机制。例如，通过OVA可以研究CD4+和CD8+ T细胞（CTL）的相互作用，以及它们在免疫应答中的角色。在癌症免疫治疗研究中，OVA被用来评估新型免疫疗法的效果，如通过OVA特异性的T细胞来攻击表达OVA的肿瘤细胞，从而研究免疫细胞对肿瘤的识别和杀伤机制。这其中就涉及到OVA特异性T细胞的识别。

如何检测OVA特异性T细胞？

我们都知道T细胞介导的免疫应答是抗原提呈细胞（antigen presenting cell，APC）和T细胞通过主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）和T细胞受体（T cell receptor，TCR）相互作用的结果。MHC分子将抗原肽提呈给能够识别该抗原肽的抗原特异性T细胞。基于这一原理，我们可以通过MHC-多肽的复合物找到靶向该多肽抗原表位的抗原特异性T细胞。

OVA的2个限制性抗原表位

OVA蛋白有2个主要限制性表位，OVA 257-264和OVA 323-339，通过于MHC四聚体结合形成OVA表位肽-MHC复合物，可检测靶向OVA特定表位的抗原特异性T细胞，这种方法常用于肿瘤研究中。

★OVA 257-264 (SIINFEKL)

是 OVA 的MHC class Ⅰ (H-2K^b)限制性抗原表位，由H-2K^b分子递呈，含有8个氨基酸，可激活CD8+T细胞产生强烈的免疫应答；

在多种免疫学实验中被广泛使用，包括评估疫苗效果、研究CTL活性以及在肿瘤免疫治疗中的应用。例如，它可以用于刺激T细胞活化，激活CD8+ CTL的免疫反应。

★OVA 323-339 (ISQAVHAAHAEINEAGR)

属于H-2I-Ab限制性OVA MHC II类表位，含有17个氨基酸，主要激活CD4+辅助T细胞（Th细胞）在研究Th细胞反应、过敏反应以及自身免疫疾病中有应用。

其中OVA 257-264 (SIINFEKL)表位因其在免疫学研究中的广泛应用和重要性而被广泛研究。通过使用这些表位，研究人员能够更深入地理解T细胞识别和激活的机制，以及如何利用这些知识来开发新的肿瘤疫苗和治疗方法。

OVA四聚体在肿瘤特异性CD8+T细胞检测中的应用

MHC class Ⅰ是适应性免疫的核心功能。CD8+ T细胞对细胞表面MHC的免疫监视使免疫系统能够监测细胞转译体以根除病毒感染的细胞和癌细胞。相反，抗原呈递的失调可以导致无数的自身免疫性疾病。

肿瘤特异性抗原CD8 T细胞被认为是抗肿瘤免疫和ICI治疗应答的主要驱动因素，因为它们可以识别并杀死表达独特新抗原的癌细胞。

肿瘤免疫监测

免疫检查点抑制（ICI）疗法治疗肿瘤受到广泛关注，但是其疗效依旧有限。Saddawi-Konefka R等人建立了表达OVA抗原的模型肿瘤细胞[2]，再通过H-2Kb OVA 257-264 (SIINFEKL)四聚体检测治疗组和对照组的特异性抗原CD8 T在肿瘤组织中的浸润情况。结果

发现治疗组的特异性抗原CD8 T数量比对照组减少了大约5倍（下图）。

流式方法检测OVA-H-2Kb四聚体（抗原特异性CD8+T细胞）

肿瘤疫苗研发和评估

四聚体技术可以用于筛选和评估能够诱导强烈肿瘤特异性T细胞反应的疫苗候选物。通过检测与OVA 257-264 (SIINFEKL) 四聚体结合的T细胞作为阳性对照，研究人员可以评估疫苗诱导的免疫反应。

细胞毒性实验

四聚体技术可以用于检测和定量能够识别特定MHC-抗原肽复合物的CD8+ T细胞，这些细胞在肿瘤免疫中起到直接杀伤肿瘤细胞的作用。通过使用OVA 257-264 (SIINFEKL) 四聚体，可以检测到具有杀伤肿瘤细胞能力的CTL。

细胞表型鉴定和分选

四聚体技术常与流式细胞术结合使用，通过流式细胞仪可以快速、准确地分析T细胞表型和功能，这对于研究肿瘤特异性T细胞的特性和状态至关重要。此外，还可以结合磁性分选系统富集/分选抗原特异性CD8+T细胞。

临床应用

四聚体技术在临床上的应用包括从患者血液中纯化特定肿瘤抗原特异性的T细胞，以及在组织移植患者过继移植治疗法中的应用。例如，Cobbold等结合磁珠法使用HLA I四聚体染色技术，从干细胞移植患者血液中纯化得到了巨噬细胞病毒(CMV)特异性CTLs，并在组织移植患者过继移植治疗法中得到应用。

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[1]https://baike.baidu.com/reference/60268500/533aYdO6cr3_z3kATPTazvmhYC_BM9-quLGGW-RzzqIPmGapB5nyTcYg48Q9sPh1E0TYpIp3Y8IAhO3lCzQjnw

[2]Saddawi-Konefka R, O'Farrell A, Faraji F, Clubb L, Allevato MM, Jensen SM, Yung BS, Wang Z, Wu VH, Anang NA, Msari RA, Schokrpur S, Pietryga IF, Molinolo AA, Mesirov JP, Simon AB, Fox BA, Bui JD, Sharabi A, Cohen EEW, Califano JA, Gutkind JS. Lymphatic-preserving treatment sequencing with immune checkpoint inhibition unleashes cDC1-dependent antitumor immunity in HNSCC. Nat Commun. 2022 Jul 25;13(1):4298. doi: 10.1038/s41467-022-31941-w. PMID: 35879302; PMCID: PMC9314425.

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