Cell子刊：过表达CD47的UCART临床结果，克服了免疫排斥

一款低免疫性（HIP）通用型CD19 CAR T细胞在癌症和自身免疫疾病患者中成功规避免疫排斥。HIP细胞通过基因工程实现I类和II类HLA的缺失以及CD47的过表达。CD47的过表达能够保护细胞免受先天免疫细胞（如NK细胞和巨噬细胞）的杀伤。

在临床前研究中，HIP工程化的人原代胰岛、HIP诱导多能干细胞（iPSCs）衍生的胰岛，以及HIP工程化的人原代CD19 CAR T细胞都被证实具有完全的免疫逃逸能力，能够在完全免疫能力的异基因模型中长期存活和发挥功能。HIP CAR T细胞在异基因人源化小鼠模型中能够有效控制Nalm6癌症，并在骨髓和淋巴器官中实现持久的植入和功能维持。

8月13日，发表在《Cell Stem Cell》期刊上的一项研究，对HIP CD19 CAR T细胞产品在一期临床试验ARDENT (NCT05878184) 和GLEAM (NCT06294236) 中进行了探索性免疫分析。

SC291是来源于健康供体T细胞的异基因CD19 CAR T细胞产品，包含了CD8+和CD4+群体。该产品通过CRISPR-Cas基因编辑技术敲除了T细胞受体α恒定区 (TRAC)、β2微球蛋白 (B2M) 和II类主要组织相容性复合体转录激活因子 (CIITA) 基因，并通过双顺反子慢病毒载体实现了CD47的过表达和CD19 CAR的表达。

SC291产品中包含三种细胞亚群的混合物：部分编辑的野生型（WT）T细胞（保留HLA）、部分编辑的DKO细胞（HLA和TCR缺失，但无CAR-CD47表达盒）以及完全编辑的HIP CAR T细胞。其中，完全编辑的HIP CAR T细胞约占40.9%。研究旨在评估患者对这些不同细胞亚群的免疫反应。

对11名患者（排除了3名存在基线杀伤的患者）进行的总体免疫分析。HIP CAR T细胞在所有患者中均未诱导产生任何新的免疫反应，无论是T细胞（IFN-γ ELISpot）还是体液免疫反应（抗体）。HIP CAR T细胞也完全不受NK细胞杀伤。这强烈支持了HIP组分在患者体内的完全免疫逃逸特性。

相比之下，未过表达CD47的DKO细胞则被NK细胞有效杀伤。而对于保留HLA的WT CAR T细胞，所有患者都对其产生了同种异体免疫反应，表现为典型的T细胞（IFN-γ）应答，并在给药后第28天达到峰值，同时伴有对WT CAR T细胞的T细胞细胞毒性。这些数据证明，HIP细胞不仅避免了新的免疫反应的诱导，而且对针对其他细胞组分的持续排斥反应也不敏感。

研究进一步根据患者CD19细胞清除的程度将患者分为三个亚组。在从未实现CD19清除的患者（2名）中，外周血CD19细胞始终可检测，IgE水平仅轻微下降。这些患者对WT CAR T细胞产生了供体特异性抗体（DSAs），并持续存在。这些DSAs导致了WT CAR T细胞的NK细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）和补体依赖性细胞毒性（CDC）杀伤。

在CD19短暂清除的患者（3名）中，外周血CD19细胞先下降后又重新出现，IgE水平也随之波动。同样，这些患者也对WT CAR T细胞产生了DSAs，并在DSAs可检测时观察到WT靶细胞的ADCC和CDC杀伤。

实现CD19持久清除的患者（6名）分析，这些患者的外周血CD19细胞持续低于检测水平，IgE水平也显著下降并保持在非常低的水平。在该亚组中，SC291给药后任何时间点都未观察到针对WT CAR T细胞的DSAs。尽管这些患者对WT CAR T细胞也产生了类似的T细胞免疫反应，但DSAs的完全缺失提示了即使存在T细胞活化，患者也无法产生IgG，这表明CD19细胞在深层组织中被广泛清除。因此，缺乏针对WT CAR T细胞的DSAs被认为是评估抗体生产细胞深层组织清除最准确的标志物，甚至可能预测患者疾病的复发。

在研究中也发现了一个重要的问题：三名患者在基线时即存在对HIP细胞的杀伤。其中两名患者的血清对SC291的所有三个细胞组分（包括HIP、WT和DKO）都显示出基线抗体结合和细胞毒性。这些预先形成的抗体针对的是非HLA表位，导致HLA缺失的HIP和DKO细胞也受到影响。其中一名患者的抗体可能与Rh(D)血型抗原有关，提示在所有细胞治疗应用中都应考虑血型兼容性。第三名患者的情况更为特殊，其预先形成的抗体是由于之前接受过SIRPα-IgG4融合蛋白TTI-622治疗所致。这些IgG4抗体介导了对CD47过表达的WT和HIP CAR T细胞的ADCC杀伤，但可通过加入重组CD47来阻止。这凸显了在治疗前对患者进行基线预存抗体检测的重要性，以避免将此类患者错误地归类为无应答者。

通用细胞治疗面临的主要障碍免疫排斥有望被克服。尽管本研究主要关注免疫反应而非安全性或主要疗效指标，且基于有限的患者数据（每个亚组2-6名患者），但其结果的一致性不错。

参考文献：Hypoimmune CD19 CAR T cells evade allorejection in patients with cancer and autoimmune disease

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